小鼠骨特異性堿性磷酸酶B(ALP-B)ELISA試劑盒

更新時間：2020-01-01 12:00:00

產品貨號：KS11735

簡要描述：

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ELISA試劑盒技術流程

雙抗體夾心法(檢測未知抗原)

間接法(檢測未知抗體)

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔)。
3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)
3、加酶標抗體：于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,最后一遍用DDW洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml
6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

ELISA試劑盒需自備的設備及試劑

1. 450±10nm濾光片的酶標儀(建議儀器使用前提前預熱)

2. 單道或多道微量加液器及吸頭

3. 稀釋樣品的EP管

4. 蒸餾水或去離子水

5. 吸水紙

6. 盛放洗液的容器

ELISA試劑盒試劑準備

1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。

2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度，標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。

ELISA試劑盒試劑準備